Essai n° 249 de l’OCDE : Toxicité aiguë sur une lignée cellulaire de poisson – Test sur la lignée cellulaire RTgill-W1

L’équipe d’écotoxicologie de Staphyt s’engage à respecter les principes fondamentaux des 3R (remplacement, réduction et perfectionnement) dans tous les aspects des essais sur les animaux et met activement en pratique cet engagement dans ses activités quotidiennes en laboratoire. Par conséquent, nous nous engageons de manière cohérente et proactive dans l’identification, l’évaluation et la mise en œuvre de nouvelles méthodes pour remplacer les essais traditionnels sur les animaux.

Nous sommes heureux d’annoncer qu’une étape importante a été franchie dans le cadre de cet engagement : la mise en œuvre réussie de la ligne directrice 249 de l’OCDE, officiellement intitulée « Toxicité aiguë sur des lignées cellulaires de poissons – Test sur la lignée cellulaire RTgill-W1 », dans notre portefeuille.

Ce test est un test de viabilité cellulaire à court terme, généralement réalisé sur une période d’exposition de 24 à 72 heures. Il permet d’évaluer les effets indésirables sur les cellules branchiales en surveillant trois paramètres ou marqueurs cellulaires clés, qui, pris ensemble, indiquent la santé et l’intégrité globales des cellules :

• Intégrité de la membrane lysosomale : le test au rouge neutre permet d’évaluer les cellules viables en fonction de leur capacité à incorporer et à retenir le colorant vital dans leurs lysosomes. Une atteinte de la membrane lysosomale constitue un indicateur précoce du stress cellulaire.
• Activité métabolique (fonction mitochondriale) : mesurée à l’aide du test Alamar Blue (AB) (ou d’un test similaire à base de résazurine). Ce marqueur évalue la réduction métabolique du colorant par les enzymes intracellulaires, fournissant ainsi une indication de l’état énergétique et de la viabilité globale des cellules.
• Intégrité de la membrane cellulaire : déterminée à l’aide du test CFDA-AM. Ce paramètre mesure la perte de fluorescéine intracellulaire du cytoplasme, qui ne se produit que si la membrane cellulaire est compromise (signe de nécrose ou de lésions graves).

En évaluant ces trois paramètres cellulaires distincts, le test RTgill-W1 fournit un profil complet de la toxicité cellulaire aiguë. Cette approche in vitro rationalisée est conçue pour :

• Prédire la toxicité aiguë pour les poissons lors des essais de produits ;
• Déterminer la fourchette de doses et effectuer un présélection avant de réaliser un essai complet de toxicité aiguë sur les poissons ou tout autre essai de toxicité utilisant des poissons ;
• Générer des informations sur la toxicité destinées à être utilisées pour l’évaluation des dangers, en combinaison avec d’autres sources de données (par exemple, les relations quantitatives structure activité (QSAR), le poids de la preuve (WoE)), dans le cadre de la stratégie d’essai intégrée (ITS) ou de l’approche intégrée d’essai et d’évaluation (IATA)

Si l’objectif est de prédire, à partir des données de viabilité cellulaire, la concentration létale d’une exposition chimique aiguë chez les poissons, il convient tout d’abord de rapporter toutes les valeurs EC50 et, parmi celles-ci, d’utiliser la plus faible comme estimation la plus prudente. Cette valeur EC50 est ensuite considérée comme la valeur LC50 prédite sur 96 h chez les poissons.

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